小鼠ELISA試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被小鼠甲狀旁腺素(PTH)捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠甲狀旁腺素(PTH)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值)，計算樣品濃度。

 

　　小鼠ELISA試劑盒樣本處理及要求

 

　　1. 血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
 

　　2. 血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內于2 - 8°C 1000g離心20分鐘，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
 

　　3. 細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本：1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
 

　　注：標本溶血會影響后檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。
 

　　小鼠ELISA試劑盒操作步驟
 

　　1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
 

　　2. 設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
 

　　3. 樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。
 

　　4. 除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
 

　　5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液(350μL)，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。
 

　　6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
 

　　7. 每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。
 

　　實驗結果計算
 

　　以所測標準品的OD值為橫坐標，標準品的濃度值為縱坐標，在坐標紙上或用相關軟件繪制標準曲線，并得到直線回歸方程，將樣品的OD值代入方程，計算出樣品的濃度。